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本试剂盒是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，用于稳定、高效、便捷地从PCR产物或从多种DNA反应体系中提取纯化DNA的试剂盒。和传统的纯化方法相比，本试剂盒操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂。

本试剂盒适用于PCR反应后去除引物、酶、矿物油、甘油、盐等杂质；也同样适用于酶切、连接、磷酸化、补平或切平、随机引物等反应后的DNA纯化。所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。


本试剂盒的原理和主要操作过程如图1所示。样品中的DNA与磁珠特异性结合，在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，经洗涤充分除杂质，最后用洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来，即可获得高度纯化的DNA样品。

图1．BalbMag磁珠法PCR/DNA纯化试剂盒的纯化原理示意图。


本试剂盒具有效果稳定、纯度好、操作灵活便捷、可纯化DNA片段大小范围广等优点。根据实际状况灵活调节磁珠用量，通常15分钟内即可完成纯化。适用于100bp以上DNA片段的纯化，对达到10kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果，对长至30个碱基的引物可被完全去除。通常回收率达到90%以上。本试剂盒也适用于低浓度样品的浓缩。本试剂盒的纯化效果请参见图2。

图2．BalbMag磁珠法PCR产物DNA纯化试剂盒的纯化效果图。DNA Ladder(200bp～12kb，货号：YT425)、酶切产物或PCR产物经本试剂盒纯化前后的比较。
注：M：Marker；B (before)：纯化前；A (after)：纯化后。实际纯化效果会因实验条件、操作等而存在一定差异，本图仅供参考。


目前DNA纯化的方法主要为柱纯化试剂盒法。该方法通常需要反复离心，或者需要特殊的抽滤装置，而且柱纯化过程中的纤维切割对大片段DNA回收不太有利。而磁珠法条件温和，整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作，而以简单的磁铁吸附所代替，因而确保了操作的快速和便捷。

组分	50T	200T
BalbMag磁珠	1.5mL	6mL
溶液I (结合液)	20mL	80mL
溶液II (洗涤液)	26mL	52mL×2
溶液III (洗脱液)	5mL	20mL

保存：室温，有效期1年。

• BalbMag磁珠长期不使用时，可以4℃保存，4℃可以保存更长时间。
  
• 需自备无水乙醇和磁分离装置。
  
• 第一次使用前在每瓶溶液II (洗涤液)中加入指定量的无水乙醇（每26mL需加入39mL乙醇），混匀，并在瓶上做好标记。
  
• 磁珠悬液在静置后会发生沉降，使用前一定要涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀。
  
• 磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。
  
• 温度较低时，溶液I (结合液)可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，可置37℃水浴加热溶解，混匀后使用。
  
• 本制品适用于手工抽提，也可用于工作站或核酸自动提取仪。
  
• 可用去离子水代替洗脱液进行洗脱，但去离子水的pH不应低于6.5，如偏低可用低浓度NaOH溶液调节至7.5-8.5。
  
• 溶液I (结合液)对人体有一定的刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。

• 加入等体积的溶液I (结合液)，颠倒混匀。例如DNA样品体积为100μL，则加100μL溶液I (结合液)。
  
• 根据样品体积，参照下表用量加入BalbMag磁珠悬液(使用前务必混匀)，颠倒混匀后，室温放置3～5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  
  • 磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。

  样品体积(μL)	磁珠用量(μL)	第一次洗涤液用量(μL)	第二次洗涤液用量(μL)	洗脱液用量(μL)
  10-100	10	250	500	20-30
  100-250	20	500	500	40-50
  250-500	30	750	500	60-80
  500-800	40	1000	500	80-100

• 参照上表，通常加入250～750μL溶液II (洗涤液)，轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  
  • 如果离心管内盖有磁珠，可按住离心管整体上下颠倒两次，使磁珠被完全吸附，然后弃去上清。洗涤液用量可随磁珠的用量适当增减。通常洗涤液用量为磁珠用量的25倍左右，即20μL磁珠加入500μL洗涤液，30μL磁珠加入750μL洗涤液。
• 加入500μL溶液II (洗涤液)，重复3的操作，最终尽量吸净残留液体。
  
• 将离心管置于37℃鼓风烘箱5分钟，或室温放置5～10分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
  
• 参照上表，加入20～100μL溶液III (洗脱液)，轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3～5分钟，其间甩动离心管2～3次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20℃保存，所得溶液即为纯化的DNA样品。
  
  • 洗脱液的用量可参考步骤2后表格，其用量一般随磁珠用量增加而相应增加，为提高洗脱效率，通常不少于磁珠用量的2倍。为提高样品浓度，也可适当减少洗脱液用量。约50～55℃洗脱比室温洗脱效率略高。

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